伯樂(lè)電泳槽之電泳中緩沖液的用途 生物化學(xué)家和分子生物學(xué)家使用電泳儀來(lái)分離大分子,例如蛋白質(zhì)和核酸。這使科學(xué)家能夠分離和分析復(fù)雜混合物中的單個(gè)蛋白質(zhì)或核酸序列。實(shí)驗(yàn)室中電泳的一個(gè)典型例子是微生物學(xué)家,使用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)分離微生物群落中產(chǎn)生的DNA片段。無(wú)論目的如何,電泳儀始終需要使用緩沖液。
TL; DR
電泳通過(guò)大小,電荷和其他特性將大分子(如蛋白質(zhì)和核酸)分開(kāi)。對(duì)于通過(guò)電荷分離的電泳,科學(xué)家使用緩沖液將電荷傳輸通過(guò)凝膠。緩沖液還將凝膠保持在穩(wěn)定的pH值,從而**大程度地減少了在不穩(wěn)定的pH值下蛋白質(zhì)或核酸發(fā)生的變化。
電泳原理
電泳根據(jù)分子的大小,電荷或其他特性沿梯度將其分離。該梯度可以是電場(chǎng),或者在變性梯度凝膠電泳(DGGE)的情況下,可以是變性劑,例如尿素和甲酰胺的混合物。如果帶負(fù)電荷,蛋白質(zhì)將向陽(yáng)極遷移,如果帶正電荷,則蛋白質(zhì)將向陰極遷移。由于大分子的遷移要比小分子慢,因此科學(xué)家可以測(cè)量行進(jìn)的距離并使用對(duì)數(shù)確定碎片的大小。
變性梯度凝膠電泳
借助DGGE,DNA沿著變性能力增強(qiáng)的梯度移動(dòng),直到該能力足以使特定的DNA片段*變性或展開(kāi)。此時(shí),遷移停止。科學(xué)家可以使用這種方法根據(jù)片段對(duì)變性的敏感性來(lái)分離片段。
緩沖區(qū)的作用
在電泳基于電荷分離的情況下,緩沖液中的離子會(huì)傳輸分離所需的電荷。通過(guò)提供弱酸和弱堿的緩沖液,緩沖液還將pH值保持在狹窄的范圍內(nèi)。這很重要,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)或核酸的結(jié)構(gòu)和電荷在pH發(fā)生明顯變化時(shí)會(huì)發(fā)生變化,從而阻止了正確的分離。
典型緩沖器
對(duì)于將電泳凝膠維持在不同的所需pH范圍,不同的緩沖液是理想的??茖W(xué)家為此目的使用的典型緩沖液包括乙酸,硼酸,磷酸和檸檬酸以及甘氨酸和?;撬帷Mǔ?,pKa值(酸解離常數(shù))應(yīng)接近所需的pH。對(duì)于我們而言,**好提供低電荷量的緩沖器,以免傳導(dǎo)過(guò)多電流。